ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಎನ್ನುವುದು ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕಾಗಿ ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವ ಪ್ರಬಲ ತಂತ್ರವಾಗಿದೆ. ಇದು ನಿಯಂತ್ರಿತ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಎಲುಶನ್‌ನ ನಂತರ ಘನ ಬೆಂಬಲದ ಮೇಲೆ ನಿಶ್ಚಲವಾಗಿರುವ ಲಿಗಂಡ್‌ಗೆ ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಬಂಧವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ವಿಧಾನಗಳಿವೆ, ಪ್ರತಿಯೊಂದೂ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಅದರ ವಿಶಿಷ್ಟ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಈ ಲೇಖನದಲ್ಲಿ, ನಾವು ವಿವಿಧ ರೀತಿಯ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಅವುಗಳ ಮಹತ್ವವನ್ನು ಅನ್ವೇಷಿಸುತ್ತೇವೆ.
1. ಇಮ್ಮೊಬಿಲೈಸ್ಡ್ ಮೆಟಲ್ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (IMAC)
IMAC ನಿಕಲ್ ಅಥವಾ ಕೋಬಾಲ್ಟ್, ನಿಶ್ಚಲ ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳಿಗೆ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಪಾಲಿಹಿಸ್ಟಿಡಿನ್ (ಹಿಸ್-ಟ್ಯಾಗ್) ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ. ಅವನ-ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಸಮನ್ವಯ ಬಂಧಗಳ ಮೂಲಕ ಲೋಹದ ಅಯಾನುಗಳಿಗೆ ಬಂಧಿಸುತ್ತವೆ, ಇದು ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಲಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಆಯ್ದ ಶುದ್ಧೀಕರಣಕ್ಕೆ ಅನುವು ಮಾಡಿಕೊಡುತ್ತದೆ. IMAC ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಮತ್ತು ಮೆಟಾಲೋಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕ ಶ್ರೇಣಿಯ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.
2. ಪ್ರೋಟೀನ್ A/G ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ
ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎ ಮತ್ತು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಜಿ ಇಮ್ಯುನೊಗ್ಲಾಬ್ಯುಲಿನ್‌ಗಳ ಸ್ಥಿರ ಪ್ರದೇಶಕ್ಕೆ ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುವ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಾಗಿವೆ. ಸಂಕೀರ್ಣ ಮಿಶ್ರಣಗಳಿಂದ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲು ನಿಶ್ಚಲವಾಗಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಎ ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಜಿ ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಈ ಗುಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರೋಟೀನ್ A/G ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮೊನೊಕ್ಲೋನಲ್ ಮತ್ತು ಪಾಲಿಕ್ಲೋನಲ್ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಮತ್ತು ಇದು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯಲ್ಲಿ ಅತ್ಯಗತ್ಯ ಹಂತವಾಗಿದೆ.
3. ಲೆಕ್ಟಿನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ
ಲೆಕ್ಟಿನ್‌ಗಳು ಕಾರ್ಬೋಹೈಡ್ರೇಟ್-ಬೈಂಡಿಂಗ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಾಗಿದ್ದು, ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಗ್ಲೈಕೊಪೆಪ್ಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲು ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳಾಗಿ ಬಳಸಬಹುದು. ಲೆಕ್ಟಿನ್-ಕಾರ್ಬೋಹೈಡ್ರೇಟ್ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಸಂಕೀರ್ಣ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಲೆಕ್ಟಿನ್ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮೌಲ್ಯಯುತವಾಗಿದೆ. ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಷನ್ ಮಾದರಿಗಳು ಮತ್ತು ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ಅಧ್ಯಯನದಲ್ಲಿ ಇದು ಅನ್ವಯಗಳನ್ನು ಕಂಡುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.
4. ಇಮ್ಯುನೊಆಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ
ಇಮ್ಯುನೊಆಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿಜನಕಗಳು ಅಥವಾ ಗುರಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಸಂಬಂಧವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ. ಸೀರಮ್, ಸೆಲ್ ಲೈಸೇಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಕಲ್ಚರ್ ಸೂಪರ್‌ನಾಟಂಟ್‌ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಂತೆ ಜೈವಿಕ ಮಾದರಿಗಳಿಂದ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇಮ್ಯುನೊಆಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಸಂಶೋಧನೆ, ರೋಗನಿರ್ಣಯ ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದಲ್ಲಿ ನಿರ್ಣಾಯಕವಾಗಿದೆ.
5. ಕಿಣ್ವ ಲಿಗಾಂಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ
ಕಿಣ್ವ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳಾದ ಸಬ್‌ಸ್ಟ್ರೇಟ್‌ಗಳು, ಇನ್‌ಹಿಬಿಟರ್‌ಗಳು ಅಥವಾ ಕೊಫ್ಯಾಕ್ಟರ್‌ಗಳನ್ನು ಕಿಣ್ವಗಳು ಅಥವಾ ಕಿಣ್ವ-ತಲಾಧಾರ ಸಂಕೀರ್ಣಗಳನ್ನು ಸೆರೆಹಿಡಿಯಲು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಬಹುದು. ಈ ವಿಧಾನವು ಅವುಗಳ ವೇಗವರ್ಧಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು ಮತ್ತು ನಿಶ್ಚಲವಾಗಿರುವ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಗುರಿ ಕಿಣ್ವಗಳ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಅನುಮತಿಸುತ್ತದೆ. ಕಿಣ್ವದ ಚಲನಶಾಸ್ತ್ರ, ಕಿಣ್ವ-ತಲಾಧಾರ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು ಮತ್ತು ಕಿಣ್ವ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲು ಕಿಣ್ವ ಲಿಗಂಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಅತ್ಯಗತ್ಯ.
ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್‌ಗಳು
ಪ್ರತಿಯೊಂದು ರೀತಿಯ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಅಥವಾ ಪ್ರೋಟೀನ್ ವರ್ಗಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣದಲ್ಲಿ ವಿಶಿಷ್ಟವಾದ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯನ್ನು ಜೀವರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ವಿವಿಧ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ:
- ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು ಮತ್ತು ಟ್ಯಾಗ್ ಮಾಡಲಾದ ಸಮ್ಮಿಳನ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣ
- ಸಂಶೋಧನೆ ಮತ್ತು ರೋಗನಿರ್ಣಯಕ್ಕಾಗಿ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಕಾಯ ತುಣುಕುಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ
- ರಚನಾತ್ಮಕ ಮತ್ತು ಕ್ರಿಯಾತ್ಮಕ ಅಧ್ಯಯನಗಳಿಗಾಗಿ ಗ್ಲೈಕೊಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಗ್ಲೈಕೋಸೈಲೇಟೆಡ್ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳ ಶುದ್ಧೀಕರಣ
- ಹೆಚ್ಚಿನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟತೆ ಮತ್ತು ಚಟುವಟಿಕೆಯೊಂದಿಗೆ ಕಿಣ್ವಗಳ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣ
- ಚಿಕಿತ್ಸಕ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳಿಗಾಗಿ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಪ್ರತಿಜನಕಗಳು ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಅಣುಗಳ ಪುಷ್ಟೀಕರಣ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣ
ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯು ಸಂಕೀರ್ಣ ಜೈವಿಕ ಮಿಶ್ರಣಗಳಿಂದ ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಪ್ರೊಟೀನ್‌ಗಳ ಹೆಚ್ಚು ಆಯ್ದ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಕ್ರಾಂತಿಯನ್ನು ಮಾಡಿದೆ. ಇದರ ವೈವಿಧ್ಯಮಯ ಅನ್ವಯಿಕೆಗಳು ಜೈವಿಕ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರಜ್ಞರು, ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಶಾಸ್ತ್ರಜ್ಞರು ಮತ್ತು ಪ್ರೊಟೀನ್ ವಿಜ್ಞಾನ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಔಷಧೀಯ ಕ್ಷೇತ್ರದಲ್ಲಿ ಕೆಲಸ ಮಾಡುವ ಸಂಶೋಧಕರಿಗೆ ಇದು ಅನಿವಾರ್ಯ ಸಾಧನವಾಗಿದೆ.